IV курс каф. микробиологии,
биологический факультет МГУ
1. История изучения биологических катализаторов.
2. Основные понятия энзимологии: фермент, кофермент, субстрат, ингибитор, активатор, активный центр.
3. Отличие ферментов от небиологических катализаторов.
4. Измерение скорости ферментативных реакций как меры активности ферментов.
5. Различные способы выражения активности ферментов
6. Удельная и молекулярная активность, число оборотов.
7. Общие правила работы с ферментами. Методы определения ферментативной активности.
8. Отбор проб и непрерывные методы.
9. Спектрофотометрические и флуоресцентные методы.
10. Электродные и поляриметрические методы
11. Манометрические методы.
12. Использование колориметрических и хроматографических методов.
13. Сопряженные ферментные системы.
14. Номенклатура и классификация ферментов.
15. Шесть классов ферментов.
16. Принципы разделения на подклассы и подподклассы.
17. Выделение ферментов.
18. Выбор источника фермента.
19. Методы разрушения клеток.
20. Экстракция ферментов.
21. Осаждение ферментов солями и органическими растворителями.
22. Изоэлектрическое осаждение.
23. Денатурация нагреванием как метод фракционирования ферментов: адсорбция в растворе и колоночная хроматография.
24. Адсорбция на гелях гидроокиси алюминия и фосфата кальция.
25. Ионообменная хроматография: ионообменники, подбор условий сорбции и элюции.
26. Гидрофобная хроматография.
27. Гель-фильтрация.
28. Электрофорез и изоэлектрофокусирование.
29. Кристаллизация ферментов.
30. Чередование методов фракционирования.
31. Критерии чистоты ферментов.
32. Хранение очищенных ферментов.
Дальше идет приятная часть. Где-то это уже было.
33. Кинетика ферментативных реакций.
34. Порядок реакции.
35. Кривая зависимости активности фермента от концентрации субстрата.
36. Фермент-субстратный комплекс.
37. Теория стационарного состояния.
38. Кинетика односубстратных односторонних реакций.
39. Константа Михаэлиса.
40. Многостадийные и двусторонние реакции.
41. Двухсубстратные реакции: упорядоченный и неупорядоченный механизмы с образованием тройного комплекса, механизм без образования тройного комплекса (пинг-понг-механизм).
42. Влияние рН и температуры на активность ферментов.
43. Предстационарная кинетика. Кинетика релаксационных процессов.
44. Ингибиторы ферментов.
45. Обратимые и необратимые ингибиторы.
46. Кинетика действия ингибиторов: конкурентное, неконкурентное, смешанное и бесконкурентное ингибирование.
47. Субстратное ингибирование.
48. Структура ферментов.
49. Первичная структура белков и методы ее определения.
50. Вторичная, третичная и четвертичная структуры и их роль в функционировании ферментов.
51. Простетические группы и кофакторы.
52. Активные центры ферментов.
53. Идентификации аминокислотных остатков в активных центрах: химическая модификация и кинетические методы.
54. Механизмы действия ферментов.
55. Локализация ферментов в клетке.
56. Изоферменты.
57. Тканеспецифические ферменты.
58. Изоферментные спектры.
59. Регуляция активности ферментов.
60. Ингибирование продуктами.
61. Аллостерическая регуляция.
62. Регуляция биосинтеза ферментов.
Итак, подводим итог: у нас есть шанс.
